VALORACIÓN HEMATOLÓGICA Y QUÍMICA SANGUÍNEA DEL YAMÚ BRYCON SIEBENTHALAE, EN TRES ETAPAS DE CULTIVO(1)
ARIAS CASTELLANOS J.A. Biólogo MSc PhD; BENAVIDES BUSTOS M.MVZ; HERNÁNDEZ ARÉVALO G.MVZ MSc.; ESLAVA MOCHA P.R. MV MSc. Instituto de Acuicultura Universidad de los Llanos iall@villavicencio.cetcol.net.co
(Recibido: 19 de agosto de 2003-Aceptado: 18 de octubre de 2003)
(1)Con el auspicio de COLCIENCIAS e Instituto de Investigaciones de la Orinoquía Colombiana-IIOC.
RESUMEN
Los estudios sanguíneos sobre especies de peces nativos de Colombia son escasos, con todo y la gran utilidad para la comprensión de su fisiología. En este trabajo se comparan las variables hematológicas y los valores de química sanguínea en alevinos, juveniles y reproductores cultivados. Una muestra sanguínea obtenida por punción de la vena caudal fue centrifugada y el plasma utilizado para las pruebas químicas por colorimetría y Reflotrón®. El hematocrito determinado por microhematocrito, la hemoglobina por espectrofotometría. El recuento de eritrocitos y leucocitos con tinciones diferenciales en cámara de Neubauer y extendidos.
El hematocrito osciló entre 42,4-45% y el recuento de leucocitos entre 5,9-4,4 103/mm3, sin diferencias significativas entre edades. No se hallaron diferencias en el recuento de eritrocitos entre alevinos y juveniles pero sí entre estos y adultos. Hubo diferencias entre levinos y los otros dos grupos en la hemoglobina y recuento de trombocitos, linfocitos, neutrófilos y eosinófilos. La cantidad de monocitos varió entre los tres grupos. Lo anterior indica, de manera general, la influencia de la edad en los indicadores hematológicos de la especie. De la comparación del hemograma y el leucograma se deduce la similitud de la especie con otros brycónidos. Llama la atención los altos valores de linfocitos y trombocitos en alevinos, lo que podría sugerir respuestas del sistema inmune de diverso origen. Las proteínas totales (hasta 10,1±4,0gr/dL), glucosa (hasta 147,6±34,2mg/dL), colesterol (hasta 365,9±75,2mg/dL) y triglicéridos (hasta 343, 7±62,6) se encontraron dentro de los márgenes reportados para peces de agua dulce, en especial en los ejemplares adultos, pero con diferencias importantes entre edades.
Palabras claves: Brycon siebenthalae, yamú, hematología, química sanguínea.
ABSTRACT
The sanguine studies on species of native fish of Colombia are scarce, with utility for the understanding of their physiology. In this work the variable hematológicas and the values of sanguine chemistry are compared in cultivated fingerlings, juvenile and reproducers. A sanguine sample obtained by punction of theve in flow was centrifuged and the plasm used for the chemical tests by colorimetric methods and Reflotrón®. The hematocrite determined by microhematocrite, the haemoglobin for espectrofotometric. The erythrocytes recount and leukocytes with differential tints in camera of Neubauer and extended. The hematocrite oscillated between 42,4-45% and the recount of leukocytes among 5,9-4,4 103/mm3, without significant differences among ages. They were not differences in the erythrocytes recount among fingers and juvenile but yes between these and adults. There were differences between fingers and the other two groups in the hemoglobin and trombocytes recount, lymphocytes, neutrophyles and eosinophyles. The quantity of monocytes varies among the three groups. The above-mentioned indicates, in a general way, the influence of the age in the indicative hematologic of the species. Of the comparison of the hemogram and the leucogram the similarity of the species is deduced with other brycónidos. Calls the attention the high lymphocytes values and trombocytes in alevins, what could suggest answers of the immune system of diverse origin. The total proteins (up to 10,1±4,0gr/dL), glucose (up to 147,6±34,2mg/dL), cholesterol (up to 365,9± 75,2mg/dL) and triglycerides (up to 343,7±62,6) they were inside the margins reported for fish of fresh water, especially in the mature specimens, but with important differences among ages.
INTRODUCCIÓN
Los estudios hematológicos sobre peces nativos de Colombia son escasos y puntuales, a pesar de ser de gran utilidad para la comprensión de la fisiología, así como para el diagnóstico clínico ya sea de poblaciones naturales o de sistemas de cultivo, mas aun si se considera la ascendente contaminación ambiental y proliferación de agentes patógenos que los pueden afectar (Eslava et al.,1995a).
El yamú Brycon siebenthalae, especie nativa de los Llanos Orientales, recientemente incorporada con gran expectativa a los sistemas de producción piscícola, es una especie que se le reproduce en confinamiento utilizando extracto de hipófisis de carpa en protocolo estándar internacional (0,5mg/kg peso vivo intervalo de 12 horas, 5mg/kg peso vivo) (Pardo-Carrasco 2001 y Arias,2002). Los indicadores más importantes del proceso son: la ovulación ocurre a las seis-siete horas, a 26-27°C, después de la última aplicación hormonal; el desove se practica por estrujamiento y la fertilización en seco. La incubación se efectúa en incubadoras tipo funil de 200litros (flujo de 2litros/seg). La fertilidad llega al 51% a las seis horas pos-fertilización y la sobrevivencia embrionaria hasta un 90% a las 10 horas pos-fertilización. La eclosión se produce, a 27°C, a las 12 horas de incubación, con un desarrollo embrionario sorprendentemente rápido (Pardo-Carrasco 2001 y Arias 2002).
Se le cultiva alimentándosele con concentrados comerciales o mezclas de granos de alrededor del 25-30% de proteína bruta. Las raciones son administradas diariamente a una tasa del 3% de la biomasa, dos veces al día, seis días a la semana. En las condiciones anteriores se han logrado conversiones de 1,5 a 2 en tiempos de cultivo de cinco a seis meses hasta los 400-500g canal (Arias,2001). Es una especie excelente para la transformación de proteína de origen vegetal y para el manejo de altas energías en proporción con la proteína en la ración (Salinas et al.2001).
Con todo y las potencialidades de la especie son desconocidos los aspectos básicos de hematología y de química sanguínea, información necesaria para futuros estudios en sistemas productivos, en especial para el diagnóstico y control de eventuales problemas sanitarios.
MATERIALES Y MÉTODOS
El trabajo fue realizado entre mayo y octubre de 2001 en la Estación Piscícola del Instituto de Acuicultura de los Llanos y en el Laboratorio Clínico de la Escuela de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad de los Llanos (4o05’ N y 73 37’ O).
Se utilizaron 53 ejemplares de tres grupos de edades así: 15 alevinos (18,8±0,8cm, 101,3±13,6g), 20 juveniles (39,2±1,3cm, 910,0±69,3g) y 18 adultos (49,5±2,8cm, 1615,0±296,3g). Los animales fueron cultivados en estanques en tierra, de cría, levante y reproducción alimentándoseles con una ración comercial del 30% de proteína bruta y 3.000kcal/g de energía bruta. Las raciones fueron administradas diariamente a una tasa del 3% de la biomasa, dos veces al día, seis días a la semana. Con las siguientes condiciones ambientales: temperatura 26,5±0,7°C, pH 6,2±0,5, oxígeno disuelto 5,3±0,8mg/L, dureza 20±7ppm y transparencia por disco Secchi de 25±12cm.
Los peces capturados de su respectivo estanque fueron sometidos a reposo por 24 horas en piletas de 3m3 manteniendo la calidad del agua: temperatura 26,0±0,5°C, pH de 6,5±0,3 y oxígeno disuelto de 6,0±0,2mg/L. Previo a la toma de la muestra de sangre cada ejemplar fue tranquilizado sumergiéndolo en una solución de 2fenoxietanol de 2mL/L de agua. Se obtuvo un volumen de sangre de 2,0±0,5mL de juveniles y reproductores, y de 1,5±0,5mL de alevinos, mediante punción de la vena caudal (fig. 1), utilizando agujas de doble punta N°21,5 de 1”. La muestra sanguínea fue recibida entubo Vacutainer heparinizado los cuales fueron inmediatamente almacenados bajo refrigeración en hielo seco. Posteriormente se realizaron cinco extendidos en láminas portaobjeto para la observación en microscopio óptico de las células y se realizó la determinación del hematocrito utilizando la técnica tradicional de microhematocrito, llenando dos microcapilares para realizar una réplica por cada muestra de sangre (Goldenfarb et al.,1971 y Ellis y Daisley,1973). Una vez efectuado lo anterior se centrifugaron las muestras a 2.000rpm y 12oC durante 5 minutos, obteniéndose el plasma que se utilizó en las pruebas de determinación de proteínas totales, glucosa, triglicéridos y colesterol.
La medición de hemoglobina se realizó mediante espectrofotometría con reactivo de Drabking (Ellisy Daisley,1973). El recuento total de eritrocitos se determinó mediante la técnica de recuento con solución de Marcano (Natalino, 1992; Eslava et al.,1995a). El cálculo de los índices eritrocíticos (VCM, HCM y CHCM) fue efectuado, para todas las muestras, a partir de los datos de hematocrito, hemoglobina y recuento total de eritrocitos (Wintrobe,1934 citado por Ranzani-Paiva y Godinho,1986). El recuento total de leucocitos fue realizado por adaptación de la técnica de recuento con solución de floxina (Berraet al.,1993; Eslava et al.,1995a) en cámara de Neubauer. El recuento diferencial de leucocitos se efectuó en 200 células sobre extendidos teñidos con Wright (Eslava et al.1995a) y se promedió el resultado para cada una de las células de la serie blanca (Kavamoto et al.,1984). El recuento de trombocitos se realizó a través de lectura directa sobre láminas coloreadas con Giemsa, dada la buena calidad de la tinción para estas células, lo cual no interfirió con el recuento diferencial de leucocitos (fig. 2).
Para la determinación de proteínas totales se utilizó el método colorimétrico con reactivo de Biuret (una vez centrifugada a 4.000rpm y 12oC durante 5 minutos), leyendo en espectrofotómetro convencional “SPECTRONIC 20” previamente calibrado (Gornall,1949). Las determinaciones de glucosa, colesterol y triglicéridos se realizaron en Reflotrón® digital (Braun,1984; Trash,1984; Carstensen et al.,1985).
Los resultados son reportados como promedio±error estándar. La comparación de los promedios entre grupos fue realizada mediante ANOVA, con significancia P<0,05.
La Tabla 1 reúne los resultados obtenidos.
Tabla 1. Parámetros sanguíneos en tres edades de yamú Brycon siebenthalae.
Entre columnas letras diferentes significativamente diferentes a P<0,05.
DISCUSIÓN
Ranzani-Paiva et al.(1996) y Tavares-Días et al.(1999), reportaron para especies de Brycon de Brasil hematocritos menores (42,4% para juveniles y de 33,5 para reproductores) a los hallados en este estudio. Tales diferencias tienen en peces muy diversas causas como: la especie y la edad, (Wintrobe,1934 y Glazova,1976, citados por Ranzani-Paiva y Godinho,1986), estado nutricional, patologías, factores ambientales, del comportamiento, (Ranzani-Paiva,1995 y Amadio,1985) y estado de desarrollo reproductivo (Ranzani-Paiva et al.,1991 y Amadio, 1985). Por otra parte el mayor porcentaje de hematocrito que se reporta es posible sea consecuencia de artificios ocasionados por la técnica empleada, a este respecto Tavares-Días y Samdrim,1998) estudiaron tales diferencias en Colossoma macropomum hallando valores más altos del hematocrito cuando se emplea como anticoagulante heparina en lugar de EDTA. El hecho de no haber sido registradas diferencias significativas entre los tres grupos de edades explorados es posible se deba a la gran actividad de la especie durante todos los estados de su ciclo vital, pero requiere estudios más precisos (Camargo,1987; Satake et al.,1991 y Soareset al.,1994).
Se nota un aumento de la cantidad de hemoglobina con el aumento de la edad similar a lo reportado por Eisler (1965) y Soares et al.(1994). Tal situación se podría explicar por un aumento con la edad de las demandas de oxígeno, en particular con el desarrollo de las gónadas, como lo reporta para Mugil platanus Ranzani-Paiva,(1995). Sin embargo es necesario nuevos estudios que examinen la aparente contradicción entre el aumento de la hemoglobina y la disminución de eritrocitos con el aumento de la edad.
Ranzani-Paiva (1995) reporta comportamiento similar al hallado en este trabajo en relación con el recuento trombocitario, esto es: con el aumento de la edad disminuye la cantidad trombocitaria. Inverso a lo anterior ocurrió con los recuentos de las demás células blancas, las cuales además estuvieron dentro de rangos similares a los hallados para adultos de Brycon cephalus por Tavares-Días et al.(1999). Llama la atención la mayor cantidad de linfocitos frente a las demás células blancas en alevinos, probablemente debido al carácter de inmadurez celular que se puede presentar en esta etapa de crecimiento (Barber y Westermann,1975; Kavamoto et al.,1984; Ranzani-Paiva et al.,1991 y Zinkl et al.,1991).
En cuanto a los monocitos es especial su variación entre edades, ello merecerá en el futuro atención particular considerando la gran importancia que tienen como integrantes del sistema fagocítico, donde intervienen en la formación de centros melanomacrófagos que liberan peroxidasas bactericidas (Ellis,1977 y Bielek,1981). de los alimentos ofrecidos a los a más jóvenes presentan por lo general mayores valores, como es el que la variación del contenido circulante de proteína plasmática está directamente relacionada con el estado de desarrollo de las gónadas en peces adultos, siendo significativamente mayores en hembras durante la vitelogénesis.
Las concentraciones de glucosa halladas fueron comparativamente mayores que las reportadas para juveniles de B. cephalus por Tavares-Días et al.(1999). También en los otros dos grupos etarios los registros fueron más altos comparándolos con datos de otros teleósteos (Engel y Davis, 1964; Chavin y Young,1970 y Eslava et al.,1995a). Zaiden (2000) reporto para B. cephalus variaciones de glucosa sanguínea entre 71,3mg/dL y 123,5mg/dL en ejemplares de primera reproducción asociando tales rangos con el mayor grado de desarrollo gonadal, lo cual explicaría las diferencias encontradas en este estudio entre juveniles y adultos, pero como en casos anteriores ello merece trabajos más precisos. También el estrés, de diferentes orígenes, puede afectar muy significativamente las cantidades de glucosa sanguínea y otros parámetros aquí estudiados (Fletcher,1975 y Eslava et al.,1995b).
Los valores de colesterol y triglicéridos en todas las edades se observaron relativamente altos comparados con lo reportado para otros teleósteos (Glazova, 1976 citado por Ranzani-Paiva y Godinho,1986 y Babin,1999). Ello podría atribuirse a la calidad de la ración, tanto por el exceso de energía que pudiera tener como por el desbalance proteína-energía, causas más comunes de los altos valores que en peces cultivados son registrados (Babin,1999). Sin embargo altos contenidos de lípidos circulantes parecen normales en peces tropicales cautivos destinados a la reproducción, en este sentido Zaiden (2000), para B. hilarii reportó hasta 537,6mg/dL de triglicéridos en hembras pre-reproductivas v/s 140mg/dL en hembras pos-reproductivas (Groff y Zinkl, 1999 y Kavamoto et al.,1984). Lo anterior se explica por el traslado que estas hacen de las reservas grasas corporales hacia los ovocitos en vitelogénesis (Arias, 2002).
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen a COLCIENCIAS y a la Universidad de los Llanos por el apoyo brindado para la realización de este trabajo. A las profesoras Elizabeth Aya Baquero y Claudia Milena Rodríguez Sierra del IALL y a los estudiantes del grupo de estudio sobre sanidad de peces por su colaboración.
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Figura 1. Toma de muestra sanguínea, ejemplar juvenil de yamú.
Figura 2. Extendido de sangre de yamú Brycon siebenthalae. Eritrocitos, linfocito (flecha). Coloración Wrigth. Objetivo: 40X.